大赛璐CHIRALPAK AGP蛋白质键合型手性色谱柱使用说明

填料：硅胶表面共价键合 α1-酸性糖蛋白

粒径：5μm

接口：Waters type

出厂保存溶剂：水/异丙醇 (85/15 v/v)

操作条件：

说明：HPLC 规格的压力内操作，色谱柱填料稳定。

          给定柱温下，柱后压与流速是线性关系。

          对于一些难分离的对映体，推荐使用更长的色谱柱。

       *1 使用该类规格的色谱柱时，应尽量优化 HPLC 色谱仪（降低柱外体积），减小死体积。

       *2 使用比推荐温度更高的柱温，会影响色谱柱使用寿命。

操作过程：

• 流动相起始条件

• 缓冲溶液配制 – 举例

• 10mM 乙酸铵缓冲液配制 (1L)：

  1. 称取 770.8 mg 乙酸铵 (CH3COONH4，纯度 > 99%) 至烧杯中。

  2. 加入 800mL 色谱级水来溶解该盐，室温下(20-25℃)放置一段时间。

  3. 使用经稀释的乙酸或氨水来调节 pH 值至目标值。

  4. 将溶液用 0.22µm 滤膜过滤到有刻度的容量瓶中。

  5. 加水至容量瓶满刻度线，盖好瓶塞摇动，使溶液混合均匀。

  如果缓冲溶液需要与有机相混合，通常按体积比混合的，zui 好选择有刻度的容量瓶或移液管来量取。

  混合后，将流动相放置在超声仪中超声脱气。

  注：如果要在流动相中加添加剂，添加剂需在调节 pH 值前加入。

• 流动相

微生物在不含或含低比例有机相的流动相中较易滋生。这样的流动相需现配现用。

• 缓冲溶液

通常地，乙酸铵缓冲液的浓度是10-20mM，zui 高是100mM。也可以使用其他缓冲溶液，比如磷酸钠或磷酸钾溶液，乙酸钠溶液，甲酸盐或柠檬酸盐溶液。注意，用LC-MS检测时，要选择适合的缓冲溶液。

• 有机相

异丙醇是zui 常用的，除此之外，还有甲醇、乙醇和乙腈。这些有机溶剂的洗脱强度顺序是：异丙醇＞乙醇≥乙腈＞甲醇。

• 添加剂

阳离子和阴离子添加剂，如 N,N-二甲基正辛胺（DMOA）、三*乙酸（TFA）、辛酸（OA）、七氟丁酸（HFBA）、可少量（≤10mM）添加在流动相中以改善保留和立体选择性。但是，有些添加剂会强吸附在填料上，难以wan 全洗脱下来，色谱柱的分离能力会因此受到影响。

注意: 辛酸（OA）和二甲基正辛胺（DMOA）在水中的溶解度很低，室温下只能溶解到 2mM 辛酸（OA）或 5mM 二甲基正辛胺（DMOA）的浓度。高于该浓度就会引起溶液分层。

流动相中一旦使用了添加剂，该色谱柱就 必 须 专 柱 专 用。

• 样品

样品进样量应尽量小。建议浓度在0.2mg/mL以下，进样体积 5-10 μL。

尽量用流动相来溶解样品。如果不能溶解，可适当增加有机相的比例。样品溶液需经近似0.5µm滤膜过滤以确保使用前无沉淀。

注意: 样品用100. %或高比例的有机相溶解可能会导致在线析出。 

        化合物没有wan 全溶解不能进样。 

色谱柱保养/维护：

• 为延长柱子使用寿命，强烈建议使用保护柱。

• 如果色谱柱被一些疏水性的杂质污染，可将色谱柱反接（不连接检测器），用水/异丙醇 75/25（v/v）低流速冲洗过夜（例如，4mm 内径的色谱柱推荐 0.3mL/min）。

• 色谱柱从液相仪器上取下前，需用不含任何盐或缓冲溶液的流动相（例如水/异丙醇 90:10 (v/v)）冲洗。

• 色谱柱保存溶液，推荐使用水/异丙醇 85/15(v/v)。

  短时间保存，可置于室温 (<30°C)下。

  长时间保存，需放置在冰箱内冷藏。

注意事项：

建议使用 CHIRALPAK® AGP 专 用 保护柱，可减轻分析柱被一些对固定相有强保留的颗粒或杂质的污染。保护柱需定期更换，尤其是做生物样品分析。

换算表：

色谱柱内径/流速

压力

※1 一包保护柱柱芯中含有2个柱芯。保护柱柱芯必 须 配合大赛璐保护柱柱套（货号00081）一起使用。